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国标委发布高致病性禽流感诊断技术 新增RT-PCR等两种检测方法

2020年12月初,法国发表声明中,法国国家卫生安全署(ANSES)参考实验室确认,该国西南部一家养殖场有6000只鸭子感染H5N8型病毒,并发现大量鸭子迅速死亡。2021年1月6日,法国后续通报,该国朗德省(Landes)养禽场发生22起家禽H5N8亚型高致病性禽流感疫情,5121只家鸭和珍珠鸡感染,274只死亡,2.5万只被扑杀。
近几年,H5N8型病毒已先后在欧洲以及日本、韩国、中国等多个国家和地区均发生过规模化爆发,引发了多方关切。
为保护我国畜牧业安全,加强高致病性禽流感的诊断技术,确保第一时间发现疫情,做到可防可控。近日,国家市场监督管理总局国家标准化管理委员会正式发布《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2020)国家标准,该标准由中国哈尔滨兽医研究所、北京海关、中国动物卫生与流行病学中心等单位负责起草。
标准规定了高致病性禽流感临床诊断,样品采集、保存与运输,病毒分离与鉴定,血凝和血凝试验,禽流感病毒RT-PCR试验和禽流感病毒荧光RT-PCR试验的技术要求。
本标准将代替《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2003)标准,与旧标准相比,新标准在技术方面出现几点变化:一是增加了禽流感病毒RT-PCR试验; 二是增加了禽流感病毒实时荧光RT-PCR试验;三是删除了琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验;四是删除了间接酶联免疫吸附试验(ELISA)。

此次新增的禽流感病毒RT-PCR试验和荧光RT-PCR试验主要适用于检测禽组织、分泌物、排泄物等物质中的禽流感病毒核酸。
目前 PCR 技术只能扩增 DNA 模板,对 RNA 模板不能直接扩增。 mRNA反转录生成的 cDNA 可作为 PCR 的模板进行扩增,这种在 mRNA 反转录后进行的 PCR 扩增称为 RT-PCR 。 其特点是杂交灵敏度高,对 RNA 的质量要求较低,操作简便。目前该技术广泛应用于分析基因的转录产物、获取目的基因、合成cDNA探针、构建RNA高效转录系统等科研中。
而实时荧光RT-PCR(荧光定量聚合酶链式反应)指的是在PCR进行的同时,对其过程进行实时监测的能力,数据可在PCR扩增过程中进行收集,而非在PCR结束之后,反应以循环中首次检测到目标扩增的时间点为特征,而非在一定循环数后目标分子累计的扩增量。目标核酸的起始拷贝数越高,则会越快观察到荧光的显著增加。相反,终点法检测(也称 “读板检测”)测量的是PCR循环结束时累计的PCR产物量。
在仪器设备方面,新标准对适用仪器PCR扩增仪及配套反应管、高速台式冷冻离心机、生物安全柜、微量移液、荧光PCR仪等的配备要求及操作规范做了清晰的介绍。
标准是科学、技术及实验经验的总结。每一项标准的出台都是因时因需而生,标准的制定为某个领域在一定范围内达到秩序起到良好的规范作用。时隔18年,《高致病性禽流感诊断技术》(G/B T 18936—2020)国家标准的发布,对于高致病禽流感病毒的检测工作具有重要的技术指导意义。

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